四、显色反应

　　强心苷的显色反应包括五元不饱和内酯环、α-去氧糖、甾体母核三部分。

　　1、五元不饱和内酯环的显色反应

　　（1）间二硝基苯试剂反应（Raymond反应）

　　（2）3,5二硝基苯甲酸试剂反应（Kedde反应）

　　取试样的甲醇或乙醇溶液于试管中，加入3,5二硝基苯甲酸试剂（A液：2%的3,5-二硝基苯甲酸甲醇或乙醇溶液；B液：2mol/L氢氧化钾溶液，用前等量混合）3～4滴，产生红色或紫红色。原理与间二硝基苯试剂反应类似，本试剂可作为强心苷纸色谱和薄层色谱的显色试剂，喷雾后显紫红色，几分钟后褪色。

　　（3）碱性***试剂反应（Baljet反应）

　　取试样的甲醇或乙醇溶液于试管中，加入碱性***试剂（A液：1%***乙醇溶液；B液：5%氢氧化钠水溶液，用前等量混合）数滴，呈现橙色或橙红色，反应有时需要15分钟以后才能显色，原理也是活性亚甲基与***缩合显色。此缩合产物在485nm波长处有吸收峰，《药典》以此法测定强心苷类药物含量。

　　（4）亚硝酰铁***试剂反应（Legal反应）

　　取试样1mg～2mg，溶于2～3滴吡啶中，加3%亚硝酰铁***试剂和2mol/L氢氧化钠各1滴，反应液呈深红色并渐渐消失。