细胞免疫测定法

　　用体内试验和体外试检测定细胞免疫功能的方法。体内试验主要是作皮试，测定迟发型超敏反应(见上节皮肤试验)，常在诊断肿瘤或免疫缺陷病时使用。体外试验的方法有淋巴细胞分离技术、淋巴细胞转化试验、巨噬细胞抑制试验、玫瑰花结形成试验(包括总数 E玫瑰花结试验)、吞噬试验、四唑氮蓝试验、嗜硷粒细胞脱粒试验、淋巴细胞毒性试验以及组织定型试验和组织配型试验等。

　　细胞分离技术 　细胞免疫试验中，从血液或免疫系统器官中提取所需细胞的技术。20世纪70年代发展起来的激发荧光细胞分类技术是借助荧光激发细胞分离器，从周围的血中直接分离和收集所需要的不同种类的细胞，如粒细胞、淋巴细胞和血小板等。由于每种细胞对荧光素的结合不同,所以可用激光束照射单行流动的细胞,以激发荧光。然后收集聚焦后的荧光，用以测量细胞结合荧光素的多少，再收集经过含细胞微滴的激光，测量细胞的大小。利用光电效应,可使微滴带上不同的电荷,通过电场，细胞即能高速度、高纯度地分开。这一技术不仅能区别淋巴细胞及其亚类，而且可对正常血细胞、白血病细胞、神经系统的细胞、培养的正常细胞和培养的肿瘤细胞进行区分。

　　其他的细胞分离技术很多，其原理不外是利用各种细胞在理化性质、表面标记和细胞功能等方面的差别，将不同的细胞分开。淋巴细胞和部分粒细胞留在上清部分。在出现红细胞与血浆的界面时，血浆层底部含有丰富的淋巴细胞。若在抗凝的全血中加入葡聚糖或明胶，可促进红细胞聚集，加速红细胞下沉。另外一个方法是梯度离心法，利用聚蔗糖-泛影葡胺分层液，它的比重(1.077)小于红细胞和粒细胞而大于淋巴细胞,它的粘度适合红细胞和粒细胞的聚集。在试验时，先将抗凝血放在分层液的液面上，然后用适当的速度离心，淋巴细胞与单核细胞即沉积于分层液与血浆的界面(其中淋巴细胞占80%以上)，其他细胞则沉落管底。

　　在分离淋巴细胞的亚群(T细胞和B细胞)时，常使用本文后面介绍的E玫瑰花结合EAC玫瑰花结技术。

　　淋巴细胞转化试验 　T细胞在体外培养时,受到非特异性有丝分裂原(如植物血凝素、美洲商陆)或特异性抗原(如结核菌素、纯蛋白衍化物)**后，可转化为淋巴母细胞并进行有丝分裂。转化的淋巴母细胞不仅呈现不成熟的母细胞形体(胞体变大、细胞浆丰富、细胞核内核仁清晰可见)，而且呈现蛋白质和核酸合成的增加，还合成并释放淋巴毒素、移动抑制因子等淋巴因子。现在我们可以采取形态学的方法，或者以3H标记胸腺嘧啶掺入量的增加来判定淋巴细胞的转化率。

　　目前常用的以植物血凝素**淋巴细胞转化的试验是非特异性的，转化率的高低只反应病人总的细胞免疫功能。正常人的转化率约为70%左右。用结核菌纯蛋白衍化物进行淋巴细胞的转化试验，是以特异性抗原去**被结核菌蛋白致敏过的T细胞发生转化,转化率一般为5～30%，它既能反应机体的总的细胞免疫功能,又能反应人体对这种特异性抗原的细胞免疫情况。淋巴细胞转化试验可用于测定结核、布氏杆菌病、慢性肝炎等传染病的细胞免疫功能，判断肿瘤的疗效和预后。

　　巨噬细胞移动抑制试验 　一种特异性细胞免疫测定法。当致敏淋巴细胞在人工培养条件下再次遇到同样抗原时，或其他一些非特异性有丝分裂原，如植物血凝素、美洲商陆、刀豆素A等,都可激发淋巴细胞产生移动抑制因子，此种因子能够抑制巨噬细胞或中性粒细胞的移动。通过测定移动抑制的程度，可以了解机体内的细胞免疫状态。在一般情况下，这种体外特异性移动抑制试验的结果,往往与迟发型变态反应皮肤试验相一致。目前,这一试验已应用于检测肿瘤、器官移植和自身免疫性疾病。

　　玫瑰花结试验 　利用细胞吸附的原理测定细胞表面受体的方法。因具有相应结构的某些细胞可吸附在淋巴细胞周围，形成玫瑰花的形状而得名。

　　在人体外周血的淋巴细胞中，T细胞和B细胞的表面受体有所不同，前者具有与绵羊红细胞结合的受体，后者约90%具有C3受体，能与补体结合。根据这种不同的表面标志，可将外周血中的T细胞和B细胞区别开。

　　E玫瑰花结试验 　人的T细胞表面有绵羊红细胞的受体，它是一种糖蛋白，能与绵羊红细胞表面糖肽相结合。将被检的淋巴细胞与绵羊红细胞悬液，在一定条件下混合孵育后再染色镜检,可见到许多吸附有绵羊红细胞(至少3个以上)的淋巴细胞(T细胞)呈玫瑰花状，称E玫瑰花结(红细胞玫瑰花结)。能形成 E玫瑰花结的不仅是人的T细胞，还有豚鼠、猪、狗和牛等的T细胞。除绵羊红细胞外，山羊、家兔、猪、马、狗、猩猩和猴等以及人的红细胞,均可作为E玫瑰花结的指示细胞。不同种系的淋巴细胞只能与某些种的红细胞结合形成 E玫瑰花结。

　　EAC玫瑰花结试验 　补体、抗人(鸡、鸽、豚鼠、牛或羊)红细胞抗体和人(鸡、鸽、豚鼠、牛或羊)红细胞结合成EAC(E指erythrocyte,细细胞、抗体、补体)复合物。90%的人B细胞表面有补体受体，可以吸附EAC形成玫瑰花结。

　　EAC玫瑰花结用于测定外周血中具有补体受体的B细胞数，正常值为13～25%。但在慢性淋巴细胞白血病和全身性红斑狼疮患者的外周血中,EAC玫瑰花结形成的细胞增多;在患体液免疫缺陷病时，B细胞显著下降。

　　吞噬试验 　用于观察机体免疫状态的试验。也可作为判断疗效的指标。体外法采全血(人、动物)或腹腔液(动物)，用抗凝剂洗涤其中的吞噬细胞，加入细菌或其他颗粒(红细胞、胶体炭粒、聚苯乙烯球形颗粒)，在37℃水浴中孵育一定时间，然后涂片染色，计算每个吞噬细胞中吞噬细菌(或其他颗粒)数目的平均值。由于人体取材困难，中国首先创用斑蟊酒精提取液**皮肤产生水泡，从中抽取含有大量巨噬细胞的渗出液，然后进行体外测定。

　　动物试验常用体内法，一般作炭粒清除，即由静脉注入胶体炭粒制剂，经过一定时间后取血检查剩余颗粒的浓度，并以血流清除炭粒的速度来说明单核吞噬细胞系统的吞噬活性。此外，还可采用注入类脂悬液、荧光颗粒、磷酸铬和用碘标记的蛋白等方法。

　　四唑氮蓝 (NBT)试验 　测定中性粒细胞内杀菌功能的简单方法。中性粒细胞在杀菌过程中能量消耗骤增，氧的消耗量增加，磷酸己糖支路糖代谢活力增强，葡萄糖分解的中间产物(6-磷酸葡萄糖)，在此支路中氧化脱氢而成5-磷酸戊糖，所脱的氢原子被外加的四唑氮蓝接受，将浅黄色的氧化型还原成点状或块状的蓝黑色甲?颗粒,沉积于中性粒细胞的胞浆中。这种细胞称为NBT阳性细胞或甲?细胞。试验时，先采病人耳血，加入肝素抗凝，与NBT液混合孵育,然后离心、制片、染色镜检、观察计数。细菌性疾病的 NBT阳性细胞的百分数和总数明显高于正常，病毒性疾病的数值则与正常无异。因此，目前用此法鉴别细菌性疾病和非细菌性疾病。