甘油冷冻保藏法

　　本方法适合于中、长期菌种保藏，保藏时间一般为2-4年左右。

　　（1）菌种保存方法-用火焰灭菌的接种环取斜面菌种在平皿上划线分离单菌落。

　　（2）菌种保存方法-平皿倒置于30℃或37℃恒温培养箱，培养24-48小时，至单菌落的大小为3mm左右。

　　（3）菌种保存方法-挑取一个单菌落，接种于一个装50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振荡培养10-15小时，至菌密度OD600为1.0-1.5。

　　（4）菌种保存方法-用火焰灭菌的接种环取少量种子液，涂片后，作革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的形态，及是否有杂菌。

　　（5）菌种保存方法-按30%甘油：种子液为1：1（V/V）的量加入无菌甘油，混合后分装至事先灭菌的菌种保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。

　　1.菌种保存方法-20%甘油保存菌种是指甘油:菌液=20:80,800ul菌液加200u灭菌l甘油后的甘油后,充分混匀后,-70度保藏.(注意甘油要慢慢吸)

　　2.菌种保存方法-将一般细菌的菌种纯化后接种于普通肉汤管，4～6h增菌后，加入适量甘油一生理盐水保存液，-20℃冰箱保存；链球菌属和奈瑟氏菌属的菌株纯化后接种于血清肉汤管，在5％～10％CO2中经8～10h增菌后，加入适量保存液，80℃低温冰箱保存；真菌菌种纯化后直接取菌洗入肉汤，不做培养，加入保存液后，-20℃冰箱保存。结果在连续3年实验期内，各菌种保存效果良好，且其形态结构、染色特性、生化反应等与标准株相符。结论使用甘油生理盐水保存法来保存菌种，各菌种保存时间长，方法简便，特别是使链球菌、奈瑟氏菌和弧菌等需特殊保存方法保存的菌株在一般实验室得以保存。

　　3.菌种保存方法-常用的是终浓度10-30%的甘油。

　　由于纯甘油十分粘稠，很难定量，一般配成终浓度50%的水溶液，高压灭菌后室温保存即可。使用时按50%甘油:菌液=1:1混合均匀，然后迅速冻结。

　　A.先把甘油稀释成50%，然后灭菌

　　这样20%的终浓度用400微的菌体加600微的50%甘油混合不就可以啦

　　纯的甘油太粘稠啦，用枪不好吸的

　　B.终浓度15%。甘油配成80%的浓度，到时候加800微升菌体，200微升甘油就好。

　　这里只是一部分方法，点击下载完整甘油保存菌种的方法

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