用高效液相色谱法测定。

色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸二氢钾6.8g与氢氧化钾液（0.1mol/L）70ml、加水稀释成约850ml并调节pH至6.3±0.1，加甲醇80ml，用水稀释成1000ml的溶液为流动相；检测波长为254nm.叶酸峰和内标物质峰的分离度应符合要求。

内标溶液的制备

取烟酰胺适量，加水溶解并稀释成每1ml中含1.0mg的溶液，摇匀，即得。

测定法

取叶酸对照品约5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加0.5％氨溶液约15ml溶解，精密加入内标溶液5ml，用同一溶剂稀释至刻度，摇匀，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取本品，同法测定，按内标法以峰面积计算，即得。

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