2.甲醇和丙酮：**磷酸钠中检查甲醇和丙酮。

本品在生产工艺中大量使用甲醇和丙酮，因此药典规定作甲醇与丙酮残留量检查。甲醇**为3.1ng.3.雌酮：炔雌醇中检查雌酮。

本法系根据雌酮的Zimmermann反应来检查的。即在羰基的邻位具有活泼亚甲基的化合物在碱性的氢氧化钾乙醇溶液中，与间二硝基苯反应呈红～蓝色。雌酮是17-酮甾类，因此根据该反应生成紫红色化合物。在此操作中，如果不使用纯度高的间二硝基苯，则呈褐色而难于判定。

4.硒中国药典中规定醋酸**、醋酸氟轻松要检查"硒".其原理为在氧瓶燃烧破坏后的吸收液中加盐酸羟胺，使Se6+还原为Se4+，在pH2.0±0.2的条件下与2.3-二氨基萘试液作用，生成4，5-苯丙苯硒二唑，用环己烷提取，于378nm波长处呈最大吸收。

5.其他甾体①薄层色谱法②高效液相色谱法含量测定1.高效液相色谱法2.紫外分光光度法3.四氮唑比色法四氮唑盐的种类：①2，3，4-三苯基氯化四氮唑（TTC），也称红四氮唑（RT），其还原产物为不溶于水的深红色三苯甲zan②蓝四氮唑（BT），即3，3-二甲氧苯基-双-4，4-（3，5-二苯基）氯化四氮唑，其还原产物为暗蓝色的双甲zan反应原理：皮质激素C17-α-醇酮基（-CO-CH2OH）具有还原性，在强碱性试液中能将四氮唑盐定量地还原为有色甲zan.生成颜色随所用试剂和条件的不同而定，多为红色或蓝色。

测定方法：中国药典采用氯化三苯四氮唑法。

例如醋酸**龙软膏的含量测定。

讨论：

①基团影响：C11-酮基的反应速度快于C11-羟基甾体；C21-羟基酯化后较其母体羟基的反应速度慢；当酯化了的基团为三甲基醋酸酯、磷酸酯或琥珀酸酯时，反应更慢。

②溶剂和水分的影响：含水量大时会使呈色速度减慢，但含水量不超过5%时，对结果几无影响，因此可采用95%乙醇。

③碱的种类及加入顺序的影响：在各类碱中，采用氢氧化四甲基铵能得到满意结果，故最为常用。以先加四氮唑盐溶液再加碱液较好。

④空气中氧及光线的影响：反应及其产物对光敏感，故应避光。

⑤温度与时间的影响：一般室温或30℃恒温条件下显色。中国药典多数25℃暗处反应40～45min.4.异烟肼比色法甾体激素C3-酮基及某些其他位置上的酮基都能在酸性条件下与羰基试剂异烟肼缩合形成黄色异烟腙，在一定波长下具有最大吸收。

某些具有两个酮基的甾体激素可形成双腙，如黄体酮、可的松和氢化可的松等。

本法主要用于甾体激素制剂的测定，如倍他米松软膏、哈西奈德软膏、倍他米松磷酸钠及其注射液等的含量测定讨论：①溶剂的选择：只用用无水乙醇和无水甲醇才能得到满意的结果，其他溶剂因受到异烟肼盐酸盐在其中溶解度的限制不能采用。

②酸的种类和浓度以及异烟肼的浓度：当酸与异烟肼试剂的摩尔比为2：1时可获得最大吸收度。

③水分、温度、光线和氧的影响：当溶剂中含水量增高，吸收度随之降低。温度升高，反应加速。当在具塞玻管中不致使溶剂挥发及吸收水分的情况下，光与氧不影响反应。

④关于反应的专属性：具有Δ4-3-酮基的甾体激素在室温不到1h即可定量地与酸性异烟肼反应。其他甾酮化合物需在长时间放置或加热后方可反应完全，因此在上述反应条件下，本法对Δ4-3-酮甾体具有一定的专属性。

5.Kober反应比色法Kober反应是指雌激素与硫酸-乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后重新加热发生颜色改变，并在515nm附近有最大吸收。

Kober反应有两步：①与硫酸-乙醇光热产生黄色，在465nm处有最大吸收；②加水或稀硫酸稀释，重新加热显桃红色，在515nm处有最大吸收。

中国药典采用本法测定炔雌醇片及复方炔诺孕酮片、复方炔诺孕酮滴丸、复方左炔诺孕酮滴丸中的炔雌醇的含量。

维生素类药物维生素A维生素A的结构为具有一个共轭多烯侧链的环己烯，因而具有许多立体异构体。

天然维生素A主要是全反式维生素A.性质：具紫外吸收，易氧化变质，能与三***呈色，与***、**、环己烷或是由醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。

鉴别试验①三***反应（Carr-price反应）：维生素A在饱和无水三***的无醇***溶液中，即显蓝色，渐变成紫红色。

②紫外吸收光谱：维生素A分子中含有5个共轭双键，其无水乙醇溶液在波长326nm处有最大吸收。当在演算催化下加热，则发生去水反应而生成脱水维生素A.后者比维生素A多一个共轭双键，使其最大吸收峰红移，同时在350～390nm波长范围内出现3个最大吸收峰。

③薄层色谱：以硅胶G为吸附剂，环己烷-**（80：20）为流动相。

含量测定：紫外分光光度法（三点校正法）

原理：本法是在三个波长处测定吸收度，根据校正公式计算吸收度A校正值后，再计算含量，故本法亦称"三点校正法".原理如下：

①杂质的吸收在310～340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大，吸收度变小。

②物质对光的吸收具有加和性。

三点波长的选择法①第1点：选择维生素A的最大吸收波长（即λ1）。

②第2点和第3点：在最大吸收波长的两侧各选一点（即λ2和λ3）。

等波长差法：在λ1的左右各选一点为λ2和λ3，使λ3-λ1＝λ1-λ2.维生素A醋酸酯。

等吸收法：在λ1的左右各选一点为λ2和λ3，使Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1.维生素A醇。

③维生素A2和维生素A3；维生素A的氧化产物（环氧化物、维生素A醛和维生素A酸）；维生素A在光照下产生的无生物活性的聚合物鲸醇；维生素A的异构体；合成时产生的中间体。

④测定方法：第一法（使用于维生素A醋酸酯）

取维生素A醋酸酯，精密称定，加环己烷制成每1ml中含9～15单位的溶液。然后在300、316、328、340、360nm五个波长处分别测定吸收值，确定最大吸收波长（应为328nm）。计算各波长下的吸收度与328nm波长下的吸收度的比值。

计算：

a.求吸收系数，吸收系数＝A/cl.b.求效价（U/g），U/g＝吸收系数×19001900为维生素A醋酸酯在环己烷溶液中测定的换算因数。