与苯胺缩合形成黄色至棕黄色产物，与联苯胺紫外分光光度法形成淡红至红色产物。

        水解反应。尼克刹米分子中的酰胺基在碱性条件下可水解，加氢氧化钠试液，加热，即有二乙胺臭味逸出，能使湿润的红色石蕊试纸变成蓝色。

        沉淀反应。尼克刹米分子中的吡啶环也可以和重金属离子反应。尼克刹米和硫酸铜及硫氰酸铵作用，生成草绿色配位化合物的沉淀。 

        异烟肼中游离肼的检查：薄层色谱法。肼的检测限为0.1μg，控制**为0.02%。异烟肼的含量测定：异烟肼分子中的酰肼基具有还原性，可采用氧化还原滴定法测定其含量。溴酸钾法。甲基橙作指示剂，溴酸钾滴定止粉红色消失。每1ml的溴酸钾滴定液（0.1667mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O.异烟肼的片剂、注射剂均采用溴酸钾法测定含量。

        还可使用溴量法、剩余碘量法测定含量，也可用非水溶液滴定法。

        尼克刹米含量测定：非水溶液滴定法。溶剂：冰醋酸，指示剂：结晶紫，滴定液：高氯酸。至溶液蓝绿色。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于17.82mg的C10H14N2O。紫外分光光度法。测定尼克刹米注射剂含量。注射剂的溶剂对非水溶液滴定法有干扰，所以采用本法。使用0.5%硫酸溶液溶解样品，是为了使药物呈离解状态，易溶于水。