一、基本原理
沉淀法也称溶解度法,其纯化生物大分子的原理是根据物质的结构差异(如蛋白质分子表面疏水基团和亲水基团比例的差异)来改变溶液的某些性质(如pH值、极性、离子强度、金属离子等),使抽提液中有效成分的溶解度发生变化,从而达到从抽提液中分离有效成分的目的。
蛋白质和核酸在组成、结构及性质等方面有明显差异,所以制备这两种大分子时,所用的试剂和操作方法也不完全相同。
1.对沉淀形式的要求
(1)沉淀的溶解度要小,以保证被测组分能沉淀完全。
(2)沉淀要纯净,不应带入沉淀剂和其他杂质。
(3)沉淀易于过滤和洗涤,以便于操作和提高沉淀的纯度。
(4)沉淀易于转化为称量形式。
2.对称量形式的要求
(1)称量形式应具有确定的化学组成,否则无法计算分析结果。
(2)称量形式应具有足够的化学稳定性。
(3)称量形式的分子量应尽可能大,这样可使称量的物质质量较大,从而减小称量误差,提高方法的准确度。
3.结果计算
若称量形式与测定组分相同,称量形式的称量值为W,样品重为S,则含量百分率的计算式为:
在很多情况下,称量形式的化学组成与被测组分的表示式不相同,则需将称量形式的量W换算成被测组分的量W′。
式中,F为换算因数(或称化学因数)。换算因数是待测组分的分子量(或原子量)与称量形式的分子量的比值。