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Hb测定方法大致分为:①根据Hb分子组成测Hb(全血铁法);②根据血液物理特性测Hb(比密法、折射仪法);③根据Hb与O2可逆性结合的特性测Hb(血气分析法),④根据Hb衍生物光谱特征定量测Hb(比色法)。
1、氰化高铁血红蛋白法(HiCN)
1966年被ICSH推荐为参考方法。该法操作简单、显色快、结果稳定可靠、读取吸光度后可直接定值等优点。其致命的弱点是氰化钾(KCN)试剂有剧毒,使用管理不当可造成公害。
2、十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法(SDS):该法操作简单、呈色稳定、准确性和精确性符合要求、无公害等优点。但由于摩尔消光系数尚未最后确认,不能直接用吸光度计算Hb浓度,而且SDS试剂本身质量差异较大会影响检测结果。
3、叠氮高铁血红蛋白(HiN 3)法:该法优点与HiCN测定法相似、最大吸收峰在542nm、显色快、结果稳定、试剂毒性仅为HiCN测定法的1/7,但仍存在公害问题。
4、碱羟血红蛋白(AHD 575)测定法:该法试剂简单、呈色稳定、无公害、吸收峰在575nm、可用氯化血红素作为标准品。但仪器多采用540nm左右滤光板,限制了此法使用。
5、溴代十六烷基三甲胺(CTAB)血红蛋白测定法:该法试剂溶血性强又不破坏白细胞,适用于仪器上自动检测Hb和白细胞。缺点是测定结果的准确度和精密度不佳。
6、沙利(Sahli)酸化血红蛋白法:该法简单易行,但重复性差、误差较大,已被列为县以上医院淘汰的实验项目。
7、血细胞分析仪:优点是操作简单、快速、同时可获得多项红细胞参数,血红蛋白测定原理与手工法相似,但由于各型仪器使用溶血剂不同,形成Hb的衍生物不同。仪器须经HiCN标准液校正后才能使用。仪器法测定精度(CV)约为1%.
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